【題目】正常細胞不能合成干擾素,但含有干擾素基因。我國科學家釆用基因工程技術生產干擾素a-2b已實現量產。具體做法是將產生干擾素的人白細胞的mRNA分離,反轉錄得到干擾素基因。將含有四環素、氨芐青霉素抗性基因的質粒PBR322和干擾素基因進行雙酶切,用連接酶連接。將重組載體DNA分子在一定條件下導入大腸桿菌,在培養基中篩選培養,檢測干擾素的表達量,選出高效表達的工程菌。請回答:

1)在分化誘導因子作用下,正常細胞可以擺脫抑制、合成干擾素,該過程發生的實質是________________________________

2)據下圖分析,構建重組載體DNA分子時,可以選用_____兩種限制酶對質粒pBR322和干擾素基因進行雙酶切,目的是既能保證目的基因和質粒正向連接,又能防止_____________________________(答兩點)。

3)將重組質粒導入大腸桿菌中,然后將細菌涂布到含_____的選擇培養基上培養,就可得到含質粒PBR322或重組質粒的細菌單菌落;再從每一個單菌落中挑取部分細菌轉涂到含有_____的培養基上,不能生長的絕大部分是含有重組質粒的細菌,原因是_____

4)干擾素在體外保存非常困難,如果將其分子中的一個半胱氨酸變成絲氨酸,在-70°C 條件下可以保存半年。實現這一轉變需要直接對_____進行修飾或改造,這屬于蛋白質工程的范疇。

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