【題目】轉座子是指能從基因組的一個位置移動到另一個位置的 DNA 片段。Ac 片段能編碼轉座 酶,可自主移動。DS片段需在轉座酶作用下,才可以從原來的位置上切離下來,然后隨機 插入到所在染色體的其他位置或其他染色體上。

1)用________酶將 DS片段構建在 Ti 質粒的T-DNA 片段上,再用含有該重組質粒的 ________轉化水稻,自交篩選獲得 DS-T-DNA純合體(甲)。以同樣方法獲得Ac-T-DNA 純合體水稻(乙)。

2)甲、乙雜交獲得 Ac/Ds 雙因子轉座系統水稻,在其后代中篩選到一些淡綠葉突變體。 利用淡綠葉突變體與野生型水稻(甲)進行系列雜交實驗,________代獲得野生型和 淡綠葉水稻植株分別為 442 株和 130 株,分離比符合31,初步推測淡綠葉突變是單 基因的________性突變。將 442 株野生型植株單株收獲和播種,后代發生性狀分離的 植株占________,則進一步確認上述推測。

3)為進一步確定突變性狀與 Ds 切離轉座的相關性,設計 6 種引物(如圖 1),對上述 572 株子代的 T-DNA 進行 Ds 轉座的 PCR 檢測。

①檢測原理:Ds 未發生切離的DNA位點,通過引物________可得到400 bp 的擴增產物;Ds 已發生切離的 DNA 位點通過引物________可得到 870 bp的擴增產物。

②擴增產物的電泳結果如圖 2,據此判斷________類型為淡綠葉突變體。

A 類型:B 類型:C 類型=_______,則突變性狀產生與 Ds 片段的切離轉座有關。

【題目】γ-氨基丁酸(GABA)是成年動物體中樞神經系統的主要抑制性神經遞質。

(1)神經元未受刺激時,細胞膜靜息電位為________。通常情況下,當突觸前神經元釋放的GABA與突觸后膜上的________結合后,Cl-通道開放,Cl-順濃度梯度內流,從而產生抑制性效應。

(2)研究大鼠等哺乳動物(包括人類)胚胎發育早期未成熟神經元時發現,GABA的生理效應與成熟神經元相反。其原因是胞內Cl-濃度顯著________于胞外, GABA作為信號引起Cl- ________(填“內流”或“外流”),從而產生興奮性效應。

(3)在個體發育的不同階段,神經系統內GABA的通道型受體的特性(既是GABA受體,也是雙向Cl-通道)并未改變,GABA的兩種作用效應與細胞膜上兩種Cl-跨膜共轉運體NKCCl和KCC2有關,其作用機制如圖1所示。(圖中共轉運體的大小表示細胞膜上該轉運體的相對數量)

據圖可知,大鼠成熟神經元中含量相對較低的Cl-共轉運體是________。

(4)為探究GABA興奮性效應對神經元發育的影響。將不同基因分別轉入三組大鼠胚胎神經組織。待幼鼠出生后第14天,顯微鏡下觀察神經元突起的數量及長度(圖2)。

與對照組相比,實驗組幼鼠單個神經元________,由此證明GABA的興奮性效應保證了神經元正常發育。通過檢測實驗組EGFP的分布及熒光強度以確定KCC2蛋白的________。

(5)在患神經性病理痛的成年大鼠神經元中也檢測到GABA的興奮性效應,推測該效應與KCC2和NKCC1表達量有關。研究者以“神經性病理痛”模型大鼠為實驗組,用________技術檢測KCC2和NKCC1的含量。若結果為________,則證實上述推測。

(6)該系列研究其潛在的應用前景為________。

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